詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
維生素B6測試盒
微量法100T/96S
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
維生素B6(Vitamin B6)又稱吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在體內以磷酸酯的形式存在,是一種水溶性維生素,在細胞中參與多種蛋白質和氨基酸的代謝,對生物體具有極其重要的作用。
測定原理
VB6與4-氨基安替比林在強氧化劑作用下生成穩定的黃色化合物,在390nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體70mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體1mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體8mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體8mL×1瓶,4℃避光保存。
樣本處理
組織:將樣品磨碎,按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸餾水0.4mL,混勻后于25℃,16000rpm離心10min,取上清測定(動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘)。
細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入0.6mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);加蒸餾水0.4mL,混勻后于25℃,16000rpm離心10min,取上清測定。
血清:直接測定。
測定操作
空白管 | 測定管 | |
樣品(μL) | 40 | |
試劑一(μL) | 40 | |
試劑二(μL) | 40 | 40 |
試劑三(μL) | 60 | 60 |
試劑四(μL) | 60 | 60 |
充分混勻,25℃反應20min,于微量石英比色皿/96孔板,測定390nm處吸光值,記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管。空白管只要做一管。 |
計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.3635x+0.0205,R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量計算
VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反總÷(V樣×Cpr)
= 13.76×(△A - 0.0205)÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反總÷(V樣×W÷V樣總)
= 13.76×(△A - 0.0205)÷ W
3. 按照細胞數量計算
VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)
= 13.76×(△A - 0.0205)÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.3635×V反總÷V樣
= 13.76×(△A - 0.0205)
V反總:反應總體積,0.2mL;:V樣:加入樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL; Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.1818x+0.0205,R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量計算
VB6含量(μg/mg prot)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反總÷(V樣×Cpr)
= 27.52×(△A - 0.0205)÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
VB6含量(μg/g)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818 ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)
= 27.52×(△A - 0.0205)÷ W
3. 按照細胞數量計算
VB6含量(μg/104 cell)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)
= 27.52×(△A - 0.0205)÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
VB6含量(μg/mL)=(△A - 0.0205)÷ 0.1818×V反總÷V樣
=27.52×(△A - 0.0205)
V反總:反應總體積,0.2mL;:V樣:加入樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL; Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
注意事項
若測定結果中吸光值超過1,請將樣本稀釋后進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。
蛋白濃度較高的樣品,比如動物組織,若顯色完成后有沉淀產生,將樣本稀釋后再測定,在計算公式中乘以稀釋倍數。
顯色完成后立即進行測定。
上海牧榮生物科技有限公司
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