簡(jiǎn)要描述:維生素E測(cè)試盒 維生素E(Vitamin E,VE)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
維生素E測(cè)試盒
微量法100T/48S
測(cè)定意義
維生素E(Vitamin E)是一種脂溶性維生素,其水解產(chǎn)物為生育酚,是生物體中最主要的抗氧化劑之一,能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷,維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能,具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用,在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理
VE還原Fe3+為Fe2+,F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物,在530nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、漩渦震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑三:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑四:液體6mL×1瓶,4℃保存。
樣本處理
組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,勻漿后用提取液定至1mL,定至在漩渦混勻儀上震蕩5min,于25℃,5000g離心10min,取上層測(cè)定。
細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min)后在漩渦混勻儀上震蕩5min,于25℃,5000g離心10min,取上層測(cè)定。
血清:取0.1mL,加0.9mL提取液,漩渦儀混勻上震蕩5min,于25℃,5000g離心10min,取上層測(cè)定。
測(cè)定操作
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
樣品(μL) | 100 | 100 |
試劑一(μL) | 20 | 20 |
試劑二(μL) | 20 | |
試劑三(μL) | 20 | |
充分混勻,25℃反應(yīng)5min | ||
試劑四(μL) | 60 | 60 |
充分混勻,于微量石英比色皿/96孔板,無水乙醇調(diào)零,測(cè)定530nm處吸光值,記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。 |
計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VE含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反總÷(V樣×Cpr)
= 9.09×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VE含量(μg/g)= (△A -0.0065)÷ 0.22×V反總÷(V樣×W÷V樣總)
= 9.09×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VE含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)
= 9.09×(△A -0.0065)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VE含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷ 0.22×V反總÷V樣×10
= 90.9×(△A -0.0065)
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.11x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VE含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.11×V反總÷(V樣×Cpr)
= 18.18×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VE含量(μg/g)= (△A -0.0065)÷0.11×V反總÷(V樣×W÷V樣總)
= 18.18×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VE含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.11×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)
= 18.18×(△A -0.0065)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VE含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷0.11×V反總÷V樣×10
= 181.8×(△A -0.0065)
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng)
若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀,需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?,并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
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