詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)測試盒
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
β-GD廣泛存在于動物組織中,是一種參與腫瘤侵襲和轉移過程的基質降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富,測定胃液β-GD活性對于研究胃癌具有重要的意義。
測定原理
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產生游離的酚酞,通過測定苯酚含量反應該酶活性高低。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:1μmol/mL標準儲備液10mL,4℃保存;
樣品測定的前處理
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定
試劑名稱(μL) | 加樣孔 | ||
測定管 | 標準管 | 空白管 | |
試劑一 | 20 | 20 | 20 |
試劑二 | 20 | 20 | 20 |
樣本 | 10 | ||
1μmol/mL標準液 | 10 | ||
蒸餾水 | 10 |
混勻后,37℃反應30min
試劑三 | 150 | 150 | 150 |
混勻, 540nm下測定各管吸光值
注意:標準管和空白管只需測一次。
β-GD活性計算
(1)按樣本鮮重計算:
單位定義:每小時每g鮮重樣品中催化產生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。
β-GD(μmol/h/g 鮮重)= (C標準管×V1)×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=2×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每小時每mg組織蛋白催化產生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。
β-GD(μmol/h/mg prot)= (C標準管×V1)×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=2×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
C標準管:標準管濃度, 1μmol/mL;V1:加入樣本體積:0.01mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
上海牧榮生物科技有限公司
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