詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
淀粉分支酶(SBE)測試盒
微量法100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關鍵酶,測定SBE活性在淀粉生物合成、優質農作物品種選育和品質遺傳改良研究中具有重要意義。
測定原理
直鏈淀粉和碘結合后在660nm有特征光吸收,SBE使直鏈淀粉含量減少,從而降低了淀粉-碘復合物在660nm吸收值,一定時間內吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,4℃保存;臨用前每支加入1mL蒸餾水,95℃沸水浴充分溶解后備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體13mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體1mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長到660 nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
試劑名稱(μL) | 對照管 | 測定管 |
95℃水浴1min后滅活的粗酶液 | 65 | |
粗酶液 | 65 | |
試劑一 | 85 | 85 |
試劑二 | 10 | 10 |
混勻,37℃準確保溫20 min,置95℃水浴中5 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻
試劑三 | 130 | 130 |
試劑四 | 10 | 10 |
混勻,室溫靜置10min,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,660nm處讀取各管吸光值。每個測定管需設個一個對照管。
注意:
1、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。2、試劑二如有沉淀,務必沸水浴溶解后使用。
SBE活力單位的計算
1、按照蛋白濃度計算
單位的定義:以波長660nm的吸光度下降百分率表示,每mg蛋白在反應體系中每降低1%碘藍值為一個酶活性單位。
SBE活性(U/mg prot)=( A對照管-A測定管)/A對照管÷Cpr ×100
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義:以波長660nm的吸光度下降百分率表示,每g組織在反應體系中每降低1%碘藍值為一個酶活性單位。
SBE活性(U/g 鮮重)=(A對照管-A測定管)/A對照管÷(W÷V樣總)×100
V樣總:提取液總體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g。
上海牧榮生物科技有限公司
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