詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
---|---|---|---|
應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ/CoQ細胞色素C還原酶測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
線粒體復合體Ⅲ(EC 1.10.2.2)又稱CoQ-細胞色素C還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中,是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責把還原型CoQ的氫傳遞給細胞色素C,生成還原型細胞色素C。
測定原理:
與氧化型細胞色素C不同,還原型細胞色素C在550nm有特征光吸收,因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復合體Ⅲ酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:液體20mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體1.5mL×1支,-20℃保存;
試劑四:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×1支,-20℃保存;
試劑六:液體2.5mL×1瓶,-20℃保存;
樣本的前處理:
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
將勻漿600g,4℃離心5min。
棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅲ(此步可選做)。
步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復30次),用于復合體Ⅲ酶活性測定。
測定步驟:
分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至550nm,蒸餾水調零。
樣本測定
(1)工作液的配制:將試劑五轉移到試劑四中混合溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、25μL試劑六和200μL工作液,立即混勻,記錄550nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。
復合體Ⅲ活力單位的計算:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol 還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅲ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=615×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol 還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅲ活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=124×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.248×ΔA
V反總:反應體系總體積,2.35×10-4 L;ε:細胞色素C摩爾消光系數,1.91×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。
b.使用96孔板測定的計算公式如下:
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol 還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1230×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
(2) 按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol 還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅲ活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=248×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。
復合體Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.496×ΔA
V反總:反應體系總體積,2.35×10-4 L;ε:細胞色素C摩爾消光系數,1.91×104 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。
上海牧榮生物科技有限公司
國內試劑耗材經銷代理。
國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。
提供加急物流處理,進口貨物,最快交期1-2周。
進出口貨物代理服務。
公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
質量保證,所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源,加強網絡建設,提高公司內部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。
公司突出創新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優惠的價格。
線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ/CoQ細胞色素C還原酶測試盒
產品咨詢