簡(jiǎn)要描述:半胱氨酸(Cys)含量測(cè)試盒 半胱氨酸(cysteine, Cys)含量測(cè)定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶(hù)全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
半胱氨酸(Cys)含量測(cè)試盒
微量法 100T/96S
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中,Cys是一種含有巰基的含硫氨基酸,從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái),并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成,經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,并且補(bǔ)充巰基,以維持皮膚的正常代謝,調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。
測(cè)定原理:
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍(lán),在600nm處有吸收峰;通過(guò)600nm吸光度,計(jì)算Cys含量。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、85%磷酸和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。用前1天,向試劑三中加2.5mL蒸餾水充分溶解,再加85%磷酸0.625mL,混勻后蓋緊(防止水分散失)沸水浴2h;冷卻后加10mL蒸餾水,4℃可保存2周。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。用不完的試劑4℃可保存3天。
半胱氨酸提取:
液體樣品中半胱氨酸提取:取0.1mL液體樣品,加試劑一0.9mL,充分混勻,8000g
4℃離心10min,取上清液,待測(cè)。
組織中半胱氨酸提取:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10 min,取上清液待測(cè)。
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到600 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測(cè)定吸光值,記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL標(biāo)準(zhǔn)液,100μL試劑二,100μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測(cè)定吸光值,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測(cè)定吸光值,記為A測(cè)定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式:
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 按液體樣品的體積計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×(V樣總÷V樣)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol/g 鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×(V樣總÷V樣)÷W=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷W
3. 按照蛋白濃度計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]÷(V樣×Cpr)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷Cpr
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:
氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)] ×(V樣總÷V樣×細(xì)胞數(shù)量)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度,1 μmol/mL;V標(biāo)準(zhǔn)品:反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.02mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積,0.02 mL;V樣總:樣品提取液,1mL;W:樣品質(zhì)量,g。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 按液體樣品的體積計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×(V樣總÷V樣)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
2. 按質(zhì)量計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol/g 鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×(V樣總÷V樣)÷W=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷W
3. 按照蛋白濃度計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]÷(V樣×Cpr)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷Cpr
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:
氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)] ×(V樣總÷V樣×細(xì)胞數(shù)量)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度,1 μmol/mL;V標(biāo)準(zhǔn)品:反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.02mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積,0.02 mL;V樣總:樣品提取液,1mL;W:樣品質(zhì)量,g。
注意事項(xiàng):
*低檢出限為100μmol/L。
上海牧榮生物科技有限公司
國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷(xiāo)代理。
國(guó)外試劑的訂購(gòu)。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。
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