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半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測試盒

簡要描述:半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測試盒 半胱氨酰亞砜裂解酶(L-cysteine sulfoxide lyase, CSL)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發需求,提供方便、快捷的服務。

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  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-06
  • 訪  問  量:250

詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測試盒

微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)廣泛存在于百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥),十字花科蕓薹屬

(如卷心菜,菜花,西蘭花),以及豆科中的合金歡屬中,并通常被稱為蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰轉肽酶和半胱氨酸亞砜裂解酶的作用下轉化成香菇精,以及產生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是內源性甲醛生成的關鍵酶之一,測定CSL活性對于研究食品安全具有重要意義。

測定原理

CSL催化S-甲基-L-半胱氨酸亞砜反應產生丙酮酸,與2,4-二硝*苯肼反應,在堿性條件下顯棕紅色,在510nm下有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機、酶標儀、96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

試劑組成和配制 

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加入2mL水溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存;

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存,臨用前加入10mL水溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存;

試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。

試劑四:液體6mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑五:液體30mL×1瓶,4℃保存。

樣本處理

按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿,4℃浸提40min。12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。            

測定操作


對照管

測定管

樣品(μL)

50

50

試劑一(μL)


25

蒸餾水(μL)

25


試劑二(μL)

25

25

充分混勻,37℃反應20min

試劑三(μL)

100

100

試劑四(μL)

50

50

充分混勻,室溫反應5min

試劑五(μL)

250

250

充分混勻,靜置5min,吸取200μL至96孔板,測定510nm處吸光值,記為A對照和A測定,△A=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管。

 

計算公式

標準曲線:y = 0.7313x + 0.0027,R2 = 0.9993;x為標準品濃度:μmol/mL;y為吸光度△A

  1. 按蛋白含量計算

C-S lyase活性(μmol/min/mg prot)=(△A -0.0027)÷ 0.7313×V樣÷(V樣×Cpr )÷T

                    =0.068×(△A-0.0027)÷ Cpr

2. 按照樣本質量計算

C-S lyase活性(μmol/min/g 鮮重)=(△A -0.0027)÷ 0.7313×V樣÷(V樣÷V樣總×W )÷T

                    =0.068×(△A-0.0027)÷ W

V樣,加入樣本上清體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T,反應時間,20min。

 

注意事項

  1. 若測定結果中吸光值超過1,請將樣本稀釋后進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。香菇類樣本活性較大,可能需要稀釋80-100倍。


上海牧榮生物科技有限公司

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半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測試盒

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