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品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
RIPA 裂解液(強) (RIPA Lysis Buffer)
RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞、組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解后的蛋白樣品可以用于常規的 Western、IP 等。RIPA 裂解液的主要成分為 Tris-Hcl,NaCl,Triton X-100, sodium deoxycholate,SDS,可以有效裂解不同樣本并抑制蛋白降解。
RIPA 裂解液 50mL
運輸與保存方法冰袋運輸,4℃保存,有效期一年。
操作說明:對于組織樣品
組織塊用冷 PBS 洗滌,去除血污。剪成小塊置于勻漿器中。
2. 加入 10 倍組織體積本試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑)冰上全勻漿。
3. 將勻漿液轉移至 1.5ml 離心管中,振蕩。冰浴 30min,期間用移液器反復吹打,確保細胞全裂解。
4. 12000g 離心 5min,收集上清,即為總蛋白溶液。
對于培養細胞樣品:
1. 對于貼壁細胞:
a.用 PBS 沖洗細胞 2-3 次。最后一次全吸干殘留液。
b.加入適當體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數分內加入蛋白酶抑制劑)于培養板、瓶內 3-5 分鐘。期間反復晃動培養板、瓶,使試劑與細胞充分接觸。
c.用細胞刮刀將細胞及試劑刮下,收集到 1.5ml 離心管中。
2. 對于懸浮細胞:離心收集細胞,每 6 孔板細胞加約 250 ul 細胞總蛋白提取試劑(在使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑),振蕩。
3. 冰浴 30min,期間每 10 分鐘用 200ul 移液器反復吹打數次,確保細胞全裂解。
4. 12000g 離心 5min,收集上清,即為總蛋白。
注意事項:
對于組織樣品:每 50mg 組織約加入 1ml 的本試劑裂解。對于軟骨、皮膚等組織,可適當減少試劑用量,以提高蛋白濃度。
對于培養細胞樣品:
正常細胞密度下,每個 6 孔板細胞加入 250ul 左右裂解液。其它類推。
2. 樣本過量時裂解可能會出現較粘稠狀??捎靡埔浩鞣磸痛荡?,直至呈液狀為止。如果一直較稠,可再加入適量裂解液,或者使用超聲破碎儀。
3. 此試劑對人體有害,請適當防護。
上海牧榮生物科技有限公司
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