詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
---|---|---|---|
應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
淀粉脫分支酶(DBE)測試盒
微量法100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
DBE能夠專一性地裂解支鏈淀粉的α-1,6糖苷鍵,產生線性的葡萄糖鏈,在調整支鏈淀粉分子的鏈長方面有重要的作用。
測定原理
采用3,5-二硝基水楊酸法測定DBE催化支鏈淀粉產生的還原糖,通過測定還原糖含量的變化來計算DBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,4℃保存;臨用前每支加入6mL試劑一,充分混勻后備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體12mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體35mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長到540 nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
試劑名稱(μL) | 對照管 | 測定管 |
95℃水浴5min后滅活的樣本 | 100 | |
粗酶液 | 100 | |
試劑一 | 100 | |
試劑二 | 100 |
混勻,37℃準確保溫2h
試劑三 | 100 | 100 |
試劑四 | 300 | 300 |
混勻,95℃水浴5min,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,540nm處讀取各管吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設個一個對照管。
注意:可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。
DBE活力單位的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件測定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
(1)按照蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每h催化產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反總:反應體系總體積,0.2mL; V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件測定回歸方程為y = 1.9229x - 0.165;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
(1)按照蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每h催化產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷1.9229×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.52× (ΔA+0.165) ÷W
V反總:反應體系總體積,0.2mL; V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
標準曲線線性范圍為0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA線性范圍為0.01-1。
上海牧榮生物科技有限公司
國內試劑耗材經銷代理。
國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。
提供加急物流處理,進口貨物,最快交期1-2周。
進出口貨物代理服務。
公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
質量保證,所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源,加強網絡建設,提高公司內部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。
公司突出創新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優惠的價格。
淀粉脫分支酶(DBE)測試盒
產品咨詢