詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
---|---|---|---|
應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
游離脂肪酸含量(FFA)測試盒
微量法100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
游離脂肪酸,也稱為非酯化脂肪酸,在與白蛋白結合的血漿中循環。動物血液中的游離脂肪酸 (FFA )含量是一項重要的生理生化指標。血清中游離脂肪酸的濃度與脂類代謝、糖代謝、內分泌功能有關,游離脂肪酸的濃度會因為糖尿病、重癥肝障礙、甲狀腺功能亢進等疾病而上升。
測定原理:
用有機溶劑萃取FFA。含有FFA的有機液與三乙醇胺銅反應,在有機相中形成脂肪酸銅 (銅皂) FFA一Cu。Cu離子與顯色液反應形成紫紅色絡合物。反應形成的顏色深淺與Cu離子濃度的關系符合朗伯一比爾定律,因此可利用此反應進行比色。
自備的儀器和用品:
酶標儀、離心機、可調式移液器、96孔板、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
萃取液:液體 120 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體 15 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體 15 mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,室溫保存;
試劑四:液體 12 mL×1瓶,4℃保存;
樣本前處理:
1.動物組織:按照動物組織質量(g):萃取液mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL萃取液),進行冰浴勻漿。震蕩提取15min,5000 rpm 4℃離心5min,取有機相待測。
2.血清:吸取50 μL血清樣本,加入1 mL萃取液,震蕩提取15 min后,4℃,5000 rpm離心5 min,取有機相待測。
3.微生物、細胞:按照細胞數量(104個):萃取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1 mL萃取液)加入萃取液,冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲2秒,間隔3秒,總時間3min);震蕩提取15 min,然后5000 rpm 4℃離心5min,取有機相待測。
注意:有機相待測液可能存在于上層,也可能存在于下層,注意觀察,體積較多的那一層即為有機相待測液。
測定步驟:
酶標儀預熱30min以上,調節波長至550 nm。
工作液的配制:臨用前根據用量按照試劑一(V):試劑二(V):試劑三(m)=1(mL):1(mL):0.66(g)的比例充分混勻。(注意:現用現配,用多少配多少,在空瓶中配制,試劑盒中帶有4個空瓶,先將試劑一與試劑二混合,最后再加入試劑三粉劑)
3、測定管:吸取600μL樣本,加入200μL工作液,蓋緊后震蕩20 min,4℃,5000 rpm離心5 min,分層后取200μL上層有機相,加入100μL試劑四,搖勻,10 min后測定550 nm的吸光值,記為A測定。
4、空白管:吸取600μL萃取液,加入200μL工作液,蓋緊后震蕩20 min,4℃,5000 rpm離心5 min,分層后取200μL上層有機相,加入100μL試劑四,搖勻,10 min后測定550 nm的吸光值,記為A空白。
空白管只需測一次。△A=A測定-A空白
注意:1、有機溶劑易揮發,加入96孔板后應盡快檢測。
2、測定管中加入的樣本即樣本前處理中的有機相待測液。
FFA含量計算:
標準曲線:y = 0.0161x - 0.0141 R2 = 0.9985 x:棕櫚酸標準品濃度(nmol/mL)
y:吸光值差值△A
1、血清FFA含量計算:
FFA含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000
=1.242×(△A+0.0141)
2、動物組織、微生物、細胞中FFA含量計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
FFA含量(μmol/g鮮重)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(W× V1÷V2)÷1000
=0.062×(△A+0.0141)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
FFA含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V1×Cpr)÷1000
=0.062×(△A+0.0141)÷Cpr
V1:加入樣本體積,0.6mL;V2:萃取液體積,1mL;V3:加入血清(漿)體積,0.05 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:動物組織樣品質量,g; 1000:1 μmol=1000 nmol 。
注意事項:
蛋白含量不可直接用萃取液提取的有機相待測液直接測定,可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測定試劑盒。
*低檢出限為20 nmol/mL。
上海牧榮生物科技有限公司
國內試劑耗材經銷代理。
國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。
提供加急物流處理,進口貨物,最快交期1-2周。
進出口貨物代理服務。
公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
質量保證,所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源,加強網絡建設,提高公司內部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。
公司突出創新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優惠的價格。
游離脂肪酸含量(FFA)測試盒
產品咨詢