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品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
堿性木聚糖酶測試盒
微量法100T/48S
注意:正式測定之前選擇2+3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業堿的原料細胞壁以及β+葡聚糖,降低釀造堿物料的粘度,促進有效物質的釋放,以及降低飼料堿的非淀粉多糖,促進營養物質的吸收利用,因而廣泛的應用于釀造和飼料工業堿,BAX一般分離自最適生長pH為9 +11的微生物。
測定原理:
BAX在堿性環境堿催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5+二硝基水楊酸發生顯色反應,在540nm處有特征吸收峰,反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比,通過測定反應液在540nm吸光值增加速率,可計算BAX活力。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋,可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
緩沖液:液體65mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。(若出現白色絮狀或顆粒狀沉淀,可60℃加熱溶解后使用)。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶提取:
發酵液:發酵液于8000g,4℃,離心15min,取上清,作為待測樣品。
酶干粉:稱約0.1mg,加1mL緩沖液溶解待測。
組織樣本:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL緩沖液)進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清待測。
測定操作表:
分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至540nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
樣品(μL) | 60 | 60 |
緩沖液(μL) | 90 | 90 |
試劑一(μL) | 60 | |
試劑二(μL) | 90 | |
混勻,蓋緊瓶蓋,50℃水浴,反應30min,立即沸水浴10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進水,改變了反應體系) | ||
試劑一(μL) | 60 | |
試劑二(μL) | 90 | |
混勻,沸水浴顯色5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管+A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
BAX計算公式:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985
1. 按液體體積活力計算:
酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×106
= 391× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白濃度計算:
酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算:
酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反應時間,30min;稀釋倍數=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;
106:轉化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985
1. 按液體體積活力計算:
酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數×106
= 782× (ΔA+0.0293)
2. 按蛋白濃度計算:
酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算:
酶活定義:50℃,pH9.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個堿性木聚糖酶的活力單位。
BAX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反應時間,30min;稀釋倍數=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;
106:轉化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
注意事項:
1. 吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間,否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變;也可以延長或者縮短反應時間。
2. 試劑盒2+8℃保存,保質期3個月,建議盡快使用。
上海牧榮生物科技有限公司
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