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硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒

簡(jiǎn)要描述:硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒 上海牧榮生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶(hù)全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

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  • 更新時(shí)間:2024-05-09
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詳細(xì)介紹

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硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒

微量法100T/96S

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

TPX屬于過(guò)氧化物酶家族,在體內(nèi)主要通過(guò)還原過(guò)氧化氫和一些氫過(guò)氧化物來(lái)實(shí)現(xiàn)抗氧化作用,功能與GPX類(lèi)似,也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內(nèi),如酵母、植物、動(dòng)物、原生動(dòng)物、寄生蟲(chóng)、細(xì)菌和古細(xì)菌,在進(jìn)化上高度保守。TPX與細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞凋亡及腫瘤發(fā)生調(diào)控密切相關(guān)。TPX的主要功能包括細(xì)胞脫毒、抗氧化和調(diào)節(jié)由過(guò)氧化氫介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫反應(yīng)。

測(cè)定原理:

TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長(zhǎng)為240nm,通過(guò)測(cè)定240nm吸光度的下降速率,即可計(jì)算出TPX活性。

自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體120mL×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體20mL×1瓶,- 20℃保存。

試劑三:液體2mL×1支,4℃。

粗酶液提取:

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

血清等液體:直接測(cè)定。

TPX測(cè)定操作:

取微量石英比色皿或96孔板,加入4 μL上清液,180 μL試劑二,16 μL試劑三,迅速混勻后于240 nm測(cè)定10s和130s吸光度,記為A1和A2。

TPX活性計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX(nmol/min /mg prot)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

=573×(A1-A2)÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每克樣本每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min/g 鮮重)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=573×(A1-A2)÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=573×(A1-A2)÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min /mL)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷V樣÷T

=573×(A1-A2)

ε:H2O2的摩爾消光系數(shù),43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積(L),200 μ L=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL);W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),4 μL=4×10-3 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),2min。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min /mg prot)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

=1146×(A1-A2)÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每克樣本每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min/g 鮮重)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1146×(A1-A2)÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1146×(A1-A2)÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1nmol H2O2降解為1個(gè)酶活單位。

TPX活性(nmol/min /mL)=(A1-A2)÷ε÷d×V反總÷V樣÷T

=1146×(A1-A2)

ε:H2O2的摩爾消光系數(shù),43600 L/mol/cm=0.0436 L/μmol/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)體系總體積(L),200 μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL);W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),4 μ L=4×10-3 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),2min。


上海牧榮生物科技有限公司

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硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TPX)測(cè)試盒




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