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磷脂酶C(PLC)測試盒

簡要描述:磷脂酶C(PLC)測試盒 磷脂酶C( Phospholipases C,PLC )試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發需求,提供方便、快捷的服務。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-09
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詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

磷脂酶C(PLC)測試盒

微量法100T/96S

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

磷脂酶C(EC3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動植物的組織和細胞中,在細胞代謝、細胞傳遞、生長發育等方面具有重要作用。

測定原理

磷脂酶C催化水解NPPC產生對硝基苯酚,在410nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體102mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體8mL×1瓶,4℃保存。

酶液提取

  1. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

  2. 細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

  3. 血清:直接測定。

測定操作


空白管

測定管

樣品(μL)


20

試劑一(μL)

20


試劑二(μL)

100

100

充分混勻,37℃反應30min

試劑三(μL)

80

80

充分混勻,于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定410nm處吸光值,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管。

酶活計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.0191x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義每克組織每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ W

3.按照細胞數量計算

酶活性定義每104個細胞每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量) ÷T

= 17.45×(△A+0.0103)÷ 細胞數量

4.按照液體體積計算

酶活性定義每毫升血清每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T

= 17.45×(△A+0.0103)

V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min

  1. 用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y = 0.0095x - 0.0103,R2 = 0.9991

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T

= 35.09×(△A+0.0103)÷ Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義每克組織每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

= 35.09×(△A+0.0103)÷ W

3.按照細胞數量計算

酶活性定義每104個細胞每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量) ÷T

=35.09×(△A+0.0103)÷ 細胞數量

4.按照液體體積計算

酶活性定義每毫升血清每分鐘水解NPPC產生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷V樣÷T

= 35.09×(△A+0.0103)

V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min


上海牧榮生物科技有限公司

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磷脂酶C(PLC)測試盒




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