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磷脂酶A2(PLA2)測試盒

簡要描述:磷脂酶A2(PLA2)測試盒 磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)試劑盒上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發需求,提供方便、快捷的服務。

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  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-09
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詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

磷脂酶A2(PLA2)測試盒

微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

磷脂酶A2(EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,廣泛存在于動植物組織、細菌、細胞核分泌物中,參與脂肪消化,精子成熟、細胞信號傳遞、脂質過氧化修復、宿主反應等生理過程,在控制體內磷脂類物質平衡、調節機體新陳代謝、參與疾病的病理進程等方面發揮著及其重要的作用。

測定原理

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿(HEPC)產生游離巰基,與DTNB反應生成黃色物質,在412nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、超速冷凍離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制    

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體×5瓶,-20℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加入1.8mL試劑二充分混勻;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

樣品處理

  1. 組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

  2. 細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

  3. 血清:直接測定。

測定操作


對照管

測定管

樣品(μL)

20

20

試劑二(μL)

180


試劑三(μL)


180

充分混勻,37℃反應10min,于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定412nm處吸光值,記為A對照管和A測定管,△A=A測定管- A對照管

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(×d)×V反總÷(V樣×Cpr)÷T

= 73.53×△A÷Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義每克組織每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/g 鮮重)= △A÷(×d)×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

= 73.53×△A÷W

3. 細胞數量計算

酶活性定義每104個細胞每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/104 cell)= △A÷(×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)÷T

= 73.53×△A÷細胞數量

4按照液體體積計算

酶活性定義每毫升血清每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/mL)= △A÷(×d)×V反總÷V樣÷T

= 73.53×△A

:TNB消光系數,13600L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應體系中加入樣本體積,0.1mL;W:樣本質量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL;

T:反應時間,10min

b. 用96孔板測定的計算公式如下

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(×d)×V反總÷(V樣×Cpr)÷T

=147.06×△A÷Cpr

2.按照樣本質量計算

酶活性定義每克組織每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/g 鮮重)= △A÷(×d)×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

= 147.06×△A÷W

3. 細胞數量計算

酶活性定義每104個細胞每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/104 cell)= △A÷(×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)÷T

=147.06×△A÷細胞數量

4按照液體體積計算

酶活性定義每毫升血清每分鐘水解HEPC產生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2活性(nmol/min/mL)= △A÷(×d)×V反總÷V樣÷T

= 147.06×△A

:TNB消光系數,13600L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應體系中加入樣本體積,0.1mL;W:樣本質量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL;

T:反應時間,10min


上海牧榮生物科技有限公司

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磷脂酶A2(PLA2)測試盒




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