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纖維素含量(CLL)測試盒

簡要描述:纖維素含量(CLL)測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發需求,提供方便、快捷的服務。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-08
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詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

纖維素含量(CLL)測試盒  

微量法 100管/96樣

正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

纖維素是由葡萄糖組成的大分子多糖,通常與半纖維素、果膠和木質素結合在一起,是植物細胞壁的主要結構成分。纖維素是一種重要的膳食纖維,自然界中分布廣、含量最多的一種多糖。

測定原理:

纖維素為β-葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在強酸作用下,可脫水生成β-糠醛類化合物。β-糠醛類化合物與蒽酮脫水縮合,生成糠醛衍生物。顏色的深淺可間接定量測定纖維素含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL× 1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體10mL× 1支,4℃保存。

樣品的前處理:

  1. 細胞壁的提取:取約0.3g樣本,加入1mL 80%乙醇,室溫快速勻漿,90℃水浴20min(加熱過程中EP管可能爆開,建議用膠帶封口或使用防爆EP管),冷卻至室溫,6000g 25℃離心10min,棄上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(渦旋振蕩2min左右,6000g 25℃離心10min,棄上清即可),沉淀即為粗細胞壁,加入1mL試劑一(去除淀粉)浸泡15小時,6000g 25℃離心10min,棄上清,將沉淀干燥,稱重得細胞壁物質(CWM)。

  2. 纖維素的提取:稱取烘干的CWM 約5mg,加入0.5mL蒸餾水充分勻漿(若烘干物質質地堅硬,可先研碎后再加入0.5mL蒸餾水勻漿,或者用勻漿器勻漿),勻漿液轉移至EP管中,用蒸餾水定容至0.5mL,置于冰水浴中,緩慢加入0.75mL濃硫酸,混勻,冰水浴中靜置30min。8000g 4℃離心10min,取上清液,用蒸餾水稀釋20倍后待測。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至620nm,蒸餾水調零。

2、調節水浴鍋至95度。

3、工作液的配制:在試劑二中加入4mL試劑三,充分溶解,如較難溶解,可加熱攪拌;用不完的試劑4℃保存一周;

4、加樣表(在EP管中反應):

試劑(μL)

空白管

測定管

樣本


150

蒸餾水

150


工作液

35

35

濃硫酸

315

315

混勻,置95度水浴中10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,于620nm處,分別讀取空白管和測定管吸光值,ΔA=A測定管-A空白管。

注意:

1、空白管只要做一管。

2、由于濃硫酸具有強腐蝕性,請謹慎操作。

纖維素含量計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 7.875x - 0.0043;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、按樣本質量計算:

纖維素(mg /g干重)= [(ΔA+0.0043) ÷7.875×V1]÷(W×V1÷V2)×20=3.17×(ΔA+0.0043) ÷W。

V1:加入樣本體積,0.15mL;V2:加入提取液體積,1.25mL;W:樣本干重,5×10-3g;20:樣本稀釋倍數。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 5.25x - 0.0043;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、按樣本質量計算:

纖維素(mg /g干重)= [(ΔA+0.0043) ÷5.25×V1]÷(W×V1÷V2)×20=4.76×(ΔA+0.0043)

÷W。

V1:加入樣本體積,0.15mL;V2:加入提取液體積,1.25mL;W:樣本干重,約5×10-3g;20:樣本稀釋倍數。

注意:*低檢測限為1mg/g干重或10ng/ mg prot


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