簡要描述:纖維素酶(CL)測試盒 羧甲基纖維素酶測試盒 纖維素酶(cellulase,CL)/羧甲基纖維素酶活性測定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
纖維素酶(CL)測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
CL(EC 3.2.1.4)存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi),能夠催化羧甲基纖維素降解,是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。
測定原理:
采用蒽酮比色法測定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、濃硫酸和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體40mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存; 臨用前加入5mL蒸餾水和45mL濃硫酸充分溶解待用。
樣品測定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。
加樣表和測定步驟:
試劑名稱 | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 50 | 50 |
試劑一(μL ) | 90 | |
試劑二(μL ) | 370 | 370 |
蒸餾水(μL ) | 180 | 90 |
37℃振蕩反應(yīng)1h后,90℃水浴15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后
8000g 25℃離心10min,取上清,得糖化液
糖化液 (μL) | 140 | 140 |
試劑三 (μL) | 260 | 260 |
混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,測620nm下吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對照管。
CL活力計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)CL活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷V樣÷T =39.8×(ΔA+0.0462)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中CL活力的計(jì)算
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T
=0.0796×(ΔA+0.0462)
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.6mL; V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件測定回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)CL活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷2.509×V反總]÷V樣÷T =79.6×(ΔA+0.0462)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中CL活力的計(jì)算
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=79.6×(ΔA+0.0462) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=79.6×(ΔA+0.0462)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
CL活力(μg /min /104cell)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.1592×(ΔA+0.0462)
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.6mL; V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
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