詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
細胞壁不溶性酸性轉化酶(BAI)測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
蔗糖轉化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據最適 pH,Ivr分為酸性轉化酶(AI)和中性轉化酶(NI)兩種類型。
AI的最適pH為3~5。AI分為可溶性AI(S-AI)和細胞壁不溶性AI(B-AI)兩種類型。B-AI存在于細胞間隙并結合在細胞壁上,主要參與韌皮部質外體卸載時蔗糖的分解,以維持庫源之間蔗糖的濃度。
測定原理:
B-AI催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內510nm光吸收增加速率與B-AI活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液1:液體100mL×1瓶,4℃保存;
提取液2:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入10mL試劑一充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
按照組織質量(g):提取液1體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液1),進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min,棄上清,沉淀中加入1mL蒸餾水,充分震蕩混勻,12000g 4℃離心10min,棄上清,沉淀中加入1mL提取液2 充分混勻,4℃浸提過夜,12000g 4℃離心20min,取上清置冰上待測。
測定步驟和加樣表:
分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至510nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 200 | |
試劑二 | 200 |
混勻, 37℃準確水浴30min后,95℃水浴10min(蓋緊,以防水分散失),流水冷卻后充分混勻(以保證濃度不變)
試劑三 | 125 | 125 |
混勻,95℃水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中, 510nm處記錄各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數),ΔA=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管。
B-AI活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001;x為標準品濃度(μg/mL),y為吸光值。
(1)按蛋白濃度計算:
單位的定義:37℃每mg蛋白每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鮮重計算:
單位的定義:37℃每g組織每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性(μg /min /g鮮重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.05mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,30min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001;x為標準品濃度(μg/mL),y為吸光值。
(1)按蛋白濃度計算:
單位的定義:37℃每mg蛋白每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性(μg /min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鮮重計算:
單位的定義:37℃每g組織每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位。
B-AI活性(μg /min /g鮮重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.05mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,30min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
上海牧榮生物科技有限公司
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