脯氨酸脫氫酶（ProDH）測試盒

 微量法 100管/96樣

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

ProDH是存在于線粒體內(nèi)的催化脯氨酸降解的關(guān)鍵酶。脯氨酸是分布廣泛的一種滲透物質(zhì)，在脅迫條件下很多植物可以通過增加合成、減少降解而在體內(nèi)累積大量脯氨酸，降低ProDH活性對(duì)于調(diào)節(jié)滲透平衡、防止?jié)B透脅迫對(duì)植物造成傷害、清除自由基、保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)具有重要意義。

測定原理：

利用異硫氰酸甲酯檢測ProDH催化的脫氫反應(yīng)，600nm處吸光值的吸光值的變化反映酶活性的高低。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體2 mL×1支， 4℃保存；

試劑二：液體25mL×1瓶， 4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶， 4℃保存；臨用前加入4mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；

試劑四：粉劑×1瓶， 4℃保存；臨用前加入4mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；

試劑五：粉劑×4支，4℃保存；

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，1500g 4℃離心15min，取上清液于一支新的EP管中，加入一滴試劑一（用10μL的槍頭加入），渦旋混勻，冰浴放置30min后，16000g 4℃離心20min，取上清置冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至600nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測定

（1）混合液的配制：首先將試劑三和試劑四配成溶液（見試劑的組成和配制），臨用前根據(jù)用量按照試劑二（V）：試劑三（V）：試劑四（V）=2.4（mL）：0.3（mL）：0.3（mL）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少），置于30℃水浴5min；

（2）試劑五的配制：取試劑五一支，臨用前加入500μL蒸餾水充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入35μL樣本、15μL試劑五和150μL混合液，混勻，立即記錄600nm處初始吸光值A(chǔ)1和10min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

ProDH活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位定義：每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使600nm處吸光值變化0.01為一個(gè)

酶活力單位。

ProDH（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =57.14×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位定義：每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使600nm處吸光值變化0.01為一個(gè)

酶活力單位。

ProDH（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.035mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位定義：每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使600nm處吸光值變化0.005為一個(gè)

酶活力單位。

ProDH（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T =114.29×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位定義：每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使600nm處吸光值變化0.005為一個(gè)

酶活力單位。

ProDH（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =114.29×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.035mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

脯氨酸脫氫酶（ProDH）測試盒