詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
總糖含量測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前請選擇2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
糖類物質是構成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質。總糖也可稱為碳水化合物,包括可溶性的單糖,二糖以及不溶性的淀粉,纖維素,幾丁質等。
測定原理:
總糖酸水解為還原糖,在NaOH和丙三醇存在下,DNS試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物,在過量的NaOH堿性溶液中呈桔紅色,在540nm處有最大吸收峰,以此測定樣品中的總糖含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、沸水浴、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體100mL×1瓶 ,4℃保存;
試劑三:液體5mL×1瓶 ,4℃避光保存;
樣品中總糖的提取:
組織:稱取約0.1g樣品,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱30min,加入1mL試劑二,混勻,用蒸餾水定容至10mL,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)
液體樣本:取0.1mL樣本,加入1mL 試劑一,1.5mL蒸餾水,勻漿,95℃水浴中加熱30min,加入1mL試劑二,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。(注意稀釋,見注意事項)
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、調節水浴鍋至95度。
3、加樣表:
試劑(μL) | 空白管 | 測定管 |
樣本 | 8 | |
蒸餾水 | 16 | 8 |
試劑三 | 12 | 12 |
混勻,置95度水浴中10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫
蒸餾水 | 172 | 172 |
混勻,540nm測定吸光值,ΔA=A測定管-A空白管
注意:1、空白管只要做一管。
2、如果ΔA大于2,需要將上清液用蒸餾水稀釋,計算公式中乘以相應稀釋倍數。
總糖含量計算:
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.3002x - 0.0507;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、按樣本鮮重計算:
總糖(mg /g鮮重)= [(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(W×V1÷V2)×稀釋倍數=33.311×(ΔA+0.0507) ÷W×稀釋倍數。
3、按樣本蛋白濃度計算:
總糖(mg /mg prot)=[(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀釋倍數=3.3311×(ΔA+0.0507) ÷Cpr×稀釋倍數。
V1:加入樣本體積,0.008mL;V2:加入提取液體積,10mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
4、按照液體體積計算:
總糖(mg /mL)=[(ΔA+0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V3×V1÷V2)×稀釋倍數=116.59×(ΔA+0.0507)×稀釋倍數。
V1:加入樣本體積,0.008mL;V2:加入提取液體積,10mL/3.5mL; V3:液體樣本,0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
注意:*低檢測限為1mg/g鮮重或10ng/mg prot
上海牧榮生物科技有限公司
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