簡(jiǎn)要描述:亞鐵氧化酶(HP)測(cè)試盒 亞鐵氧化酶(Hephaestin,HP)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
亞鐵氧化酶(HP)測(cè)試盒
微量法 100管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
Hephaestin (HP)作為銅藍(lán)蛋白的同系物,是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亞鐵氧化酶,HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝。HP的表達(dá)可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介導(dǎo)鐵的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)中有重要作用。
測(cè)定原理:
HP催化Fe2+氧化為Fe3+,F(xiàn)e2+和ferrozine反應(yīng)顯色,在560 nm下有特征吸光值。通過測(cè)定Fe2+的減少速率可測(cè)得亞鐵氧化酶的活性。
自備用品:
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體60 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體1.5 mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體11 mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提取:
按照組織質(zhì)量(g):水(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟:
酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至560 nm。
2. 在96孔板中加入下列試劑
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
試劑一 | 50 | 50 |
試劑二 | 10 | 10 |
樣本 | 10 | 10 |
蒸餾水 | 30 | 30 |
試劑三 | 混勻,40℃靜置30 min | 100 |
試劑三 | 100 | |
混勻,立即測(cè)定A對(duì)照和A測(cè)定,ΔA=A對(duì)照-A測(cè)定。(每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管) |
HP活性計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 8.2135x - 0.0006,R2 = 0.9998;(x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/mL;y為吸光值ΔA)
按樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g樣本每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個(gè)酶活力單位。
HP(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0006)÷ 8.2135×V總÷T ÷(W× V樣÷V樣總)× 1000
= 40.58×(△A+0.0006)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg蛋白每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個(gè)酶活力單位。
HP(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0006)÷ 8.2135×V總÷T ÷(Cpr×V樣)
= 40.58×(△A+0.0006)÷Cpr
V總:反應(yīng)體系體積,0.1 mL;V樣:加入樣本體積0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;1000,μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。
上海牧榮生物科技有限公司
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