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β木糖苷酶測試盒

簡要描述:β木糖苷酶測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品,β-木糖苷酶(β- xylosidase)測定試劑盒

  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-06
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詳細介紹

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

β木糖苷酶測試盒

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶,產物木糖可作為碳源應用于微生物發酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業,比傳統的漂白法環保,具有廣泛的應用價值。

測定原理:

β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產生對硝基苯酚,對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰,測定405nm光吸收增加速率,可計算β-木糖苷酶活性。

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體1mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心20min,取上清待測。

細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

液體:直接檢測。

測定操作表:

  1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至405nm。

  2. 操作表


對照管

測定管

酶液(μL)

40

40

試劑一(μL)


10

試劑二(μL)

80

70

混勻,45℃水浴20min

試劑三(μL)

80

80

混勻,靜置5min,405nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。

β-木糖苷酶活性計算公式:

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA。

1、按蛋白濃度計算

酶活定義:45℃,pH7.4時每毫克蛋白1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000

= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質量計算:

酶活定義:45℃,pH7.4時每克樣品1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細胞數量計算:

酶活定義:45℃,pH7.4時每104個細胞1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數量(萬個)

4)按液體體積計算

酶活定義:45℃,pH7.4時每毫升液體1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣÷T×1000

=11.34×(ΔA-0.0011)

V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;T:反應時間,20min;1000:1μmol/L=1000nmol/L

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y=6.613x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA

1、按蛋白濃度計算

酶活定義:45℃,pH7.4時每毫克蛋白1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000

= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質量計算:

酶活定義:45℃,pH7.4時每克樣品1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細胞數量計算:

酶活定義:45℃,pH7.4時每104個細胞1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數量(萬個)

4)按液體體積計算

酶活定義:45℃,pH7.4時每毫升液體1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣÷T×1000

=22.68×(ΔA-0.0011)

V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;T:反應時間,20min;1000:1μmol/mL=1000nmol/mL

ΔA控制在0.01-1范圍內,若ΔA大于1,可適當減小樣本量。

標準曲線線性范圍為:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL


上海牧榮生物科技有限公司

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β木糖苷酶測試盒



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