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丙二醛(MDA)測試盒(比色法)

簡要描述:丙二醛(MDA)測試盒(比色法): 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-06
  • 訪  問  量:159

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應用領域醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥

γ谷氨酰轉肽酶(γGT)測試盒(比色法)

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平。

測定原理:

MDA與硫代巴*妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產物,在532nm有最大吸收峰,進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量;同時測定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配置:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存;

注意事項:

臨用前注意試劑一是否全溶解,如未溶解,可以70℃-90℃加熱,并振蕩以促進溶解。

MDA提?。?strong style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px; border: 0px; outline: 0px; vertical-align: baseline; background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、吸取0.3mL 試劑一于1.5mL離心管中,再加入0.1mL樣本, 混勻。

2、95℃水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心10min。

3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,測定532nm和600nm處的吸光度,記為A532和A600,ΔA= A532-A600。

MDA含量計算

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)中MDA含量的計算:

MDA含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣=25.8×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中MDA含量計算

(1)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

(2)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)=25.8×ΔA ÷W

(3 ) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)=0.0516×ΔA

V反總:反應體系總體積, 4×10-4 L;ε:丙二醛摩爾消光系數,155×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)中MDA含量的計算:

MDA含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣=51.6×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中MDA含量計算

(1)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣)=51.6×ΔA÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

(2)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)=51.6×ΔA÷W

(3 ) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)=0.1032×ΔA

V反總:反應體系總體積,4×10-4 L;ε:丙二醛摩爾消光系數,155×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。


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丙二醛(MDA)測試盒(比色法)




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