一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測(cè)定試劑盒

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過(guò)程中起著重要的作用。

測(cè)定原理：

NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算NO含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)

樣品處理：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟和操作表：

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至550nm。

2. 操作表

NO含量計(jì)算：

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細(xì)胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3

= 0.125×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3、其他樣品：

NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣

= 125×（ΔA +0.0103）

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

2. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986

1、組織樣品：

（1）按樣本重量計(jì)算

NO含量（μmoL/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr

2、細(xì)胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3

= 0.25×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3. 其他樣品：

NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V反總÷V樣= 250×（ΔA +0.0103）

V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測(cè)定試劑盒