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使用 dsGreen 染料進行 qPCR

更新時間:2024-03-18      點擊次數:293

dsGreen 是一種非常靈敏的染料,用于檢測雙鏈 DNA (dsDNA)。兩種染料均用于實時 qPCR 實驗中擴增的非特異性檢測。

  1. 如果 dsGreen 試劑儲存溫度低于 20 °С,請將其解凍并保存在室溫下。為了快速解凍,可將試劑加熱至 50 °С。

  2. 根據 PCR 試劑制造商的說明計算反應所需試劑的體積。請注意,dsGreen(庫存 100х)必須在 PCR 主混合物中稀釋至最高 1 倍濃度。

  3. 根據 PCR 試劑制造商的說明制備不含 DNA 的 1x 主混合物,添加必要量的 dsGreen。如果您使用不帶熱啟動的 Taq 聚合酶,請將預混液和 PCR 管放在冰上。

  4. 將主混合物轉移至管或板中并添加 DNA。

  5. 根據您的儀器制造商的說明繼續進行放大。

筆記:

qPCR 實驗中始終包含陽性和陰性對照。 qPCR 擴增的溫度程序與給定模板和引物的標準 PCR 程序沒有區別。對于檢測,應使用 FAM 通道。為了能夠區分特定產物和引物二聚體,請在 PCR 程序中使用熔解曲線步驟。



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