Cytion 為細胞系培養(yǎng)提供全面的指南，強調(diào)無菌和無菌技術(shù)的重要性。我們的方案可確保在一系列細胞類型和應(yīng)用中成功進行細胞培養(yǎng)。

1. 實驗室設(shè)計

設(shè)計組織培養(yǎng)實驗室需要周密的規(guī)劃，以確保在安全高效的環(huán)境中生產(chǎn)高質(zhì)量的材料。最佳設(shè)施包括用于檢疫和處理未受污染材料的不同區(qū)域，每個區(qū)域都有專用的培養(yǎng)箱。當(dāng)空間不允許按區(qū)域分開時，建議在時間上分開處理不同的材料。嚴格的清潔方案和至少遵守 2 類密封水平對于最大限度地降低污染風(fēng)險和維持受控的實驗室環(huán)境至關(guān)重要。

2. 建立無菌工作空間

• 引擎蓋實踐：通過正確定位引擎蓋窗扇并避免雜亂來保持層流氣流。

• 滅菌：移液器吸頭、玻璃移液器等高壓滅菌工具，并使用70%乙醇進行表面消毒。

3. 介質(zhì)和試劑制備

• 培養(yǎng)基選擇：查閱我們詳細的培養(yǎng)基圖表，將您的細胞系與適當(dāng)?shù)?DMEM 或 RPMI 培養(yǎng)基相匹配，并輔以胎牛血清 (FBS) 和谷氨酰胺等添加劑。

• 補充劑的無菌性：所有培養(yǎng)基和補充劑必須無菌，必要時采用過濾滅菌。

• 個人防護裝備：在細胞培養(yǎng)實驗室中，最大限度地減少傷害依賴于嚴格遵守個人防護裝備，例如符合 EN374-3 標準的手套。

• 消毒：最大限度地減少傷害還取決于正確使用次氯酸鈉或乙醇等消毒劑。為了實驗室衛(wèi)生的全面安全性和有效性，下表詳細介紹了其他消毒劑及其具體使用案例：

 4. 培養(yǎng)環(huán)境設(shè)置

• 用于貼壁細胞系的燒瓶：經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的燒瓶通常足以容納大多數(shù)細胞系。對于需要額外支持的某些細胞類型，可以對燒瓶進行預(yù)處理或用明膠或纖連蛋白等底物包被。這些涂層可以顯著改善細胞附著和增殖。詳細的制備和包衣方案可在相應(yīng)的產(chǎn)品信息表中找到。

• 用于懸浮細胞系的燒瓶：使用專為非貼壁細胞設(shè)計的燒瓶，可使其自由移動和充分的氣體交換。這些燒瓶不需要促進細胞附著的表面處理。

5. 監(jiān)測細胞健康狀況

維持細胞培養(yǎng)的健康是細胞培養(yǎng)工作的一個重要方面。持續(xù)監(jiān)測對于確保實驗結(jié)果的完整性和可重復(fù)性至關(guān)重要。以下是監(jiān)測細胞健康狀況的詳細做法：

5.1.每日檢查

• 顯微鏡評估：每天使用顯微鏡檢查細胞，評估細胞健康的關(guān)鍵指標，包括一致的細胞附著、特征形態(tài)和預(yù)期的生長模式。尋找細胞大小和形狀的均勻性、是否存在不同的細胞核以及是否缺乏可能表明細胞死亡的顆粒度。

• 生長率監(jiān)測：跟蹤增殖率，確保其與細胞系的預(yù)期倍增時間一致。生長速率的突然變化可能表明細胞健康或培養(yǎng)條件存在潛在問題。

• 培養(yǎng)基評估：檢查培養(yǎng)基的顏色，它可以指示 pH 值的變化。泛黃的培養(yǎng)基表明酸度增加，通常是細胞代謝或細菌污染的副產(chǎn)品，而紫色或粉紅色調(diào)則表明更堿性的環(huán)境。

5.2.廢棄培養(yǎng)物的標準

• 污染指標：警惕污染跡象，例如培養(yǎng)基渾濁、意外的 pH 變化或微生物菌落的存在。污染物可以是細菌、真菌或病毒，每種類型都有不同的視覺線索，例如細菌膜或真菌菌絲。

• 形態(tài)異常：如果細胞表現(xiàn)出與正常生長或分化無關(guān)的持續(xù)形態(tài)異常變化，則可能需要丟棄培養(yǎng)物。這包括廣泛的細胞變圓、脫離或細胞碎片的存在。

• 不可逆應(yīng)激跡象：尋找不可逆應(yīng)激或毒性的跡象，例如空泡形成、膜起泡或凋亡小體。這些通常是細胞死亡的前兆，并可能影響實驗結(jié)果。

• 生長條件退化：如果培養(yǎng)物已達到匯合或過度生長，導(dǎo)致營養(yǎng)耗盡和廢物積累，則應(yīng)將培養(yǎng)物進行傳代培養(yǎng)或丟棄，以避免對細胞健康產(chǎn)生負面影響。

6. 傳代策略

傳代培養(yǎng)或分裂細胞是細胞培養(yǎng)的常規(guī)部分，涉及將細胞培養(yǎng)物的一部分轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中以繁殖培養(yǎng)物。仔細的規(guī)劃和執(zhí)行對于此過程的成功至關(guān)重要。以下是一些有效傳代的增強策略：

計劃分割

• 最佳分流比：根據(jù)細胞系特征、生長速率和培養(yǎng)物的預(yù)期用途確定理想分流比。對于快速生長的細胞，這可能涉及 1:2 的分割；對于生長較慢的細胞系，可能需要 1:10 的分割。

• 供應(yīng)商規(guī)格：請參閱供應(yīng)商的產(chǎn)品表，了解針對每個細胞系的具體建議，其中通常包括詳細的傳代培養(yǎng)方案和細胞所需的條件。

• 培養(yǎng)的連續(xù)性：維護主細胞庫并使用一致的傳代培養(yǎng)程序，以確保細胞系的壽命和遺傳穩(wěn)定性。

7. 介質(zhì)維護

及時補充營養(yǎng)：應(yīng)在細胞耗盡必需營養(yǎng)之前更換培養(yǎng)基，這對于細胞的生長和代謝功能至關(guān)重要。

pH 值和毒素控制：定期改變可防止代謝副產(chǎn)物的積累并維持對細胞健康至關(guān)重要的生理 pH 值。

8. 通道數(shù)控制

傳代限制：保留細胞傳代的詳細日志。頻繁傳代會導(dǎo)致遺傳漂變，從而改變細胞表型和行為。通過限制傳代次數(shù)，可以保持細胞系的遺傳穩(wěn)定性和完整性。

傳代數(shù)記錄：每次細胞傳代培養(yǎng)時，記錄傳代數(shù)。該信息對于跟蹤細胞系歷史和識別細胞行為中潛在的傳代相關(guān)變化至關(guān)重要。

9. 確保細胞系完整性

• 驗證記錄：定期驗證細胞系身份（例如，通過短串聯(lián)重復(fù)（STR）分析）并在記錄中對此進行注釋，以確保在整個實驗中使用正確的細胞系。

• 突變監(jiān)測：如果可能，監(jiān)測可能表明遺傳漂變或細胞系污染的關(guān)鍵遺傳或表型變化，并保存這些記錄以供參考。