Duolink® 原位精簡(jiǎn)操作指南
更新時(shí)間:2023-11-28 點(diǎn)擊次數(shù):347
1. | 封閉將封閉溶液添加至樣品中。 孵育 去除封閉溶液 |
2. | 一抗將一抗在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋,并添加至樣品中。 孵育 在合適的緩沖液清洗兩次,每次5分鐘 |
3. | 將兩份PLA®探針,以1:5的比例在適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋,并添加至樣品中。 +37 °C孵育60分鐘用1 x洗滌液A清洗2次,每次5分鐘 |
4. | 在H2O中以1:5的比例稀釋連接儲(chǔ)液。
在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶并將混合物添加至樣品中。
+37 °C孵育30分鐘用1 x洗滌液A清洗2次,每次2分鐘 |
5. | 在H2O中以1:5的比例稀釋擴(kuò)增儲(chǔ)液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶并將混合物添加至樣品中。 +37 °C孵育100分鐘用1 x洗滌液B清洗2次,每次10分鐘用0.01x洗滌液B清洗1分鐘 |
6. | 成像準(zhǔn)備使用含有DAPI的Duolink原位封固劑加載樣品,等待15分鐘,然后在熒光或共聚焦顯微鏡下進(jìn)行分析。
注意: 使用沒(méi)有蓋玻片的開(kāi)放液滴反應(yīng),并在加濕室中進(jìn)行所有孵育。 請(qǐng)使用冷凍塊將酶從冷凍室(-20oC)中取出。 應(yīng)在搖床上以最小體積(70毫升),并輕微搖晃進(jìn)行清洗。
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