提取 DNA 后,大多數實驗的下一階段需要已知濃度作為輸入材料。測量DNA濃度的方法有很多,如紫外吸收法、熒光染料法、電泳法等。
DNA 分光光度計通常用于測量濃度,本文將概述它們的工作原理以及使用原因。
分光光度法是一種重要的方法,用于一系列生化實驗,包括 DNA、RNA 和蛋白質定量和質量控制。在這些應用中,通常僅提供少量樣品,并且優(yōu)選進行無損分析。使用微體積分光光度計(有時稱為納體積分光光度計或納滴分光光度計)可最大限度地減少定量樣品的使用,通常僅需要 1 µL 樣品。
分光光度法是電磁光譜法的一種形式,涉及材料的透射或反射特性隨波長的變化的定量測量。DNA 分光光度計使用檢測器記錄一定波長范圍內的光束強度。
DNA 分光光度計經常用于檢測紫外線、紅外線和可見光輻射,但它們也可以檢測電磁波譜的許多其他元素。波長范圍(可以透過測試樣本的顏色)是 DNA 光譜儀的一個重要特征。此外,樣品透射率百分比、樣品吸收率的對數范圍以及有時反射率測量的百分比對于某些應用來說是重要的特征。
在溶液中,DNA 分光光度計可以測量堿基吸收的紫外線水平。DNA 和其他核酸吸收峰值波長為 260nm 的光。吸收的光量與樣品中 DNA 的濃度成正比。使用比爾-朗伯方程根據透射光量計算濃度。要使用分光光度計定量 DNA,應將 DNA 懸浮在溶劑中,并用溶劑對分光光度計進行空白以校正任何背景吸光度。
分光光度計是極其精確、準確和復雜的設備,可以用作實驗室的臺式或模型,也可以便攜式用于現(xiàn)場工作。
DeNovix 的 DS-11 系列在分光光度測定領域提供了革命性的性能。它結構緊湊且易于使用,能夠提供具有熒光功能的全光譜紫外-可見分析,這意味著它非常適合快速核酸和蛋白質定量。