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核酸檢測常用的5種熒光染料的特點

更新時間:2023-09-14      點擊次數(shù):5158

核酸熒光染料對細胞核進行染色,定量測定細胞的熒光強度,從而可以測定細胞核中DNA和RNA的含量,分析細胞周期和細胞增殖情況。有多種熒光染料可以對細胞中的 DNA 或 RNA 進行染色。常用的DNA染料有碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

1.熒光染料PI(碘化丙啶)

熒光染料PI(碘化丙啶)是一種可以對DNA進行染色的核染色試劑。它常用于細胞凋亡檢測。英文全稱是Propidium Iodide。它是一種溴化乙錠類似物,嵌入雙鏈 DNA 后會發(fā)出紅色熒光。雖然 PI 不能穿過活細胞膜,但它可以穿過受損的細胞膜并對細胞核進行染色。 PI 通常與 Calcein-AM 或 FDA 等熒光探針一起使用,以同時對活細胞和死細胞進行染色。 PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為535 nm和615 nm。

2. EB(溴化乙錠)

溴化乙錠是一種高度敏感的嵌入熒光染料,是一種強致癌誘變劑,但價格便宜。它與 DNA 的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,每 2.5 個堿基插入大約 1 個溴化乙錠分子。 EB 的這一特性使其成為常用于瓊脂糖凝膠電泳中核酸染色的核酸染料。溴化乙錠在紫外區(qū)的302nm和366nm處有吸收峰。在紫外光照射下,溴化乙錠可激發(fā)出橙紅色熒光(590nm)。與 DNA 結(jié)合的溴化乙錠復(fù)合物發(fā)出的熒光比不結(jié)合 DNA 的染料強 20-30 倍,因此溴化乙錠可以檢測小至 10 ng 的 DNA 帶,并且非常靈敏。

3. 凝膠綠和凝膠紅

Biotium公司研發(fā)推出的EB替代染料,具有與EB相似的染色效果,且在紫外光照射下不易淬滅,因此可用于膠水回收。但價格較貴。

GelRed和GelGreen是兩種優(yōu)秀的熒光核酸凝膠染色試劑,兼具高靈敏度、低毒性和超穩(wěn)定性。其水溶性染料已通過美國EPA安全認證,廢物可直接倒入下水道,不會造成任何環(huán)境污染。

其特點是:
1)靈敏度高:GelRed和GelGreen是市場上靈敏度最高的凝膠核酸染料之一;
2)穩(wěn)定性佳:可微波爐加熱,可常溫保存;
3)更安全:艾姆斯測試結(jié)果表明該染料的致突變性遠小于溴化乙錠(EB);
4)適應(yīng)性廣:適用于預(yù)制膠和膠后電泳染色;
5)染色過程簡單:與EB一樣,無需擔(dān)心預(yù)制膠和電泳過程中染料降解;電泳后染色過程僅需30分鐘,無需脫色或水洗;
6) 對DNA和RNA遷移影響小:對核酸遷移影響比SYBR Green I?小;
7)與標準凝膠成像系統(tǒng)和可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容:使用312nm激發(fā)的UV凝膠成像系統(tǒng)時,GelRed可以替代EB; GelGreen 足以替代凝膠觀察裝置中的任一 SYB 染料。然而,這種染料會使小 DNA 片段遷移得更慢(與 EB 相比)。

4. 黃金觀 I/II

Goldview對于大的DNA片段有很好的染色效果,但是對于500bp以下的片段則不太好。另一個致命的弱點是它的熒光團在紫外光下很容易猝滅,通常需要5-10分鐘。會消失。 Goldview 也不適合膠水回收。 Goldview實際上是AO(吖啶橙,劇毒產(chǎn)品),其熒光效果遠不如EB,靈敏度差,底色嚴重,不適合回收,不穩(wěn)定,在紫外光下誘導(dǎo)突變的能力較差高。

5. SYBR Green 和 SYBR Gold

穩(wěn)定性差,毒性大。屬于花青素核酸染料。花青素染料并非無毒,只是低毒。電泳等級已修改。改性有以下三種: 1.添加鹵素或氰基。 2.插入環(huán)狀羥基。 3、添加穩(wěn)定劑。 SYBR Green I 是一種高靈敏度 DNA 熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡單:無需脫色或洗滌。至少可以檢測到20pg DNA,比EB染色高25-100倍。當SYBR Green I與雙鏈DNA結(jié)合時,熒光信號將增強800-1000倍。 SYBR Green I 染色的凝膠樣品熒光信號強,背景信號低。 SYBR Green 和 SYBR Gold 的穩(wěn)定性遠不如 EB。SYBR系列染料還可進入細胞對細胞核中的線粒體和DNA進行染色,造成傷害。 SYBR Green I已被證明在紫外線照射下具有很強的誘變能力,使DNA或其他物質(zhì)發(fā)生突變。 (您也可能對。。。有興趣熒光染料示例和應(yīng)用



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