血管細胞基礎培養基是一種無菌、不含酚紅的液體組織培養基,旨在用作完整 ATCC 原代細胞解決方案系統中的一個組件。血管細胞基礎培養基旨在支持源自正常人大血管的細胞,例如人臍靜脈內皮細胞、主動脈內皮細胞或主動脈平滑肌細胞,以及微血管內皮細胞。此外,為了支持血管系統細胞的增殖和鋪板效率,血管細胞基礎培養基必須補充適當的細胞特異性生長試劑盒。
具體應用
血管細胞基礎培養基是一種無菌、不含酚紅的液體組織培養基,旨在用作完整 ATCC® Primary Cell Solutions™ 系統的一個組件。
該系統旨在支持源自正常人類大血管的細胞,例如人臍靜脈內皮細胞、主動脈內皮細胞或主動脈平滑肌細胞,以及微血管內皮細胞。血管細胞基礎培養基含有必需和非必需氨基酸、維生素、其他有機化合物、微量礦物質和無機鹽。為了支持血管系統細胞的增殖和鋪板效率,血管細胞基礎培養基必須補充適當的細胞特異性生長試劑盒。
該系統旨在支持源自人類心血管系統的細胞,包括以下細胞類型:
源自大血管的內皮細胞
微血管內皮細胞
源自大血管的平滑肌細胞
源自心臟的肌肉細胞
該系統旨在支持源自正常人類大血管的細胞,例如人臍靜脈內皮細胞、主動脈內皮細胞或主動脈平滑肌細胞,以及微血管內皮細胞。血管細胞基礎培養基含有必需和非必需氨基酸、維生素、其他有機化合物、微量礦物質和無機鹽。為了支持血管系統細胞的增殖和鋪板效率,血管細胞基礎培養基必須補充適當的細胞特異性生長試劑盒。
原代心肌細胞;正常,人類,ATCC PCS-120-010
原代主動脈平滑肌細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-012
原發性冠狀動脈平滑肌細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-021
原發性肺動脈平滑肌細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-023
原代真皮微血管內皮細胞;正常、人類、新生兒、ATCC PCS-110-010
原代臍靜脈內皮細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-010
原代臍靜脈內皮細胞;正常,人類,混合,ATCC PCS-100-013
原代主動脈內皮細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-011
原代冠狀動脈內皮細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-020
原代肺動脈內皮細胞;正常,人類,ATCC PCS-100-022
慶大霉素-兩性霉素 B 溶液 (ATCC PCS-999-025)
青霉素-鏈霉素-兩性霉素 B 溶液 ( ATCC PCS-999-002 )
酚紅 ( ATCC PCS-999-001 )
微血管內皮細胞生長試劑盒-BBE ( ATCC PCS-110-040 )
微血管內皮細胞生長試劑盒-VEGF ( ATCC PCS-110-041 )
內皮細胞生長試劑盒-BBE ( ATCC PCS-100-040 )
內皮細胞生長試劑盒-VEGF ( ATCC PCS-100-041 )
對于源自大血管的內皮細胞(例如,正常原代人臍靜脈內皮細胞 (HUVEC)、ATCC PCS-100-010、原代臍靜脈內皮細胞;正常、人、混合、ATCC PCS-100-013、原代主動脈內皮細胞Cells,ATCC PCS-100-011),用以下試劑盒之一補充血管細胞基礎培養基:
對于源自正常人體組織的微血管內皮細胞(例如,原代真皮微血管內皮細胞;正常、人類、新生兒、ATCC PCS-110-010),用以下試劑盒之一補充血管細胞基礎培養基:
對于源自大血管的平滑肌細胞(例如,原代主動脈平滑肌細胞,ATCC PCS-100-012),用血管平滑肌細胞生長試劑盒(ATCC PCS-100-042)補充血管細胞基礎培養基。
可選媒體補充:
處理程序
完整生長培養基的制備
表 1.如果使用內皮細胞生長試劑盒-BBE (ATCC ® PCS-100-040),請添加每種成分的一定體積:
成分 | 體積 | 最終濃度 |
牛腦提取物 (BBE) | 1.0毫升 | 0.2% |
重組人EGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 單位/毫升 |
氫化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 10.0毫升 | 2% |
抗壞血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 2 . 如果使用內皮細胞生長試劑盒-VEGF (ATCC ® PCS-100-041),請添加每個成分的一定體積:
成分 | 體積 | 最終濃度 |
重組人VEGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
重組人EGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
rh FGF 堿性 | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
重組人IGF-1 | 0.5毫升 | 15納克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 單位/毫升 |
氫化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 10.0毫升 | 2% |
抗壞血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 3 . 如果使用血管平滑肌生長試劑盒 (ATCC ® PCS-100-042),請添加每個組件的一定體積:
成分 | 體積 | 最終濃度 |
rh FGF-堿性 | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
重組人胰島素 | 0.5毫升 | 5微克/毫升 |
抗壞血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
重組人EGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
表 4.如果使用微血管內皮細胞生長試劑盒-BBE (ATCC ® PCS-110-040),請添加每種成分的一定體積:
成分 | 體積 | 最終濃度 |
牛腦提取物 (BBE) | 1.0毫升 | 0.2% |
重組人EGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 單位/毫升 |
氫化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
抗壞血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 5 . 如果使用微血管內皮細胞生長試劑盒-VEGF (ATCC ® PCS-110-041),請添加每種成分的一定體積:
成分 | 體積 | 最終濃度 |
重組人VEGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
重組人EGF | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
rh FGF 堿性 | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
重組人IGF-1 | 0.5毫升 | 15納克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 單位/毫升 |
氫化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
抗壞血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 6.如果使用心肌細胞生長試劑盒 (ATCC ® PCS-120-040),請添加每種成分的一定體積:
成分 | 體積 | 最終濃度 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
胎球蛋白 | 5.0毫升 | 25毫克/毫升 |
重組人FGF-b | 0.5毫升 | 5納克/毫升 |
重組人胰島素 | 0.5毫升 | 5毫克/毫升 |
抗壞血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
重組人EGF/TGF-b1 | 0.5毫升 | 5 納克/毫升,30 皮克/毫升 |
增殖不需要抗菌劑和酚紅,但如果需要可以添加。表 7 總結了添加到完整生長培養基中的每種可選組分的建議體積。
從冰箱中取出一套生長套件;確保所有組件的蓋子均已擰緊。
在將生長套件的組件添加到基礎培養基中之前將其解凍。在添加到基礎培養基之前,需要在 37°C 水浴中加熱 L-谷氨酰胺組分并搖動以溶解任何沉淀物。
從冷藏處獲取一瓶血管細胞基礎培養基 (475 mL)。
用 70% 乙醇噴灑所有生長套件組件小瓶和基礎培養基瓶的外表面,以凈化它們。
使用無菌技術并在層流罩或生物安全柜中工作,使用單獨的無菌移液器將表 1、2、3、4 或 5 中所示的每個生長套件組件的體積轉移到基礎培養基瓶中轉移。
表 7.添加抗菌劑/抗真菌劑和酚紅(可選)
成分 | 體積 | 最終濃度 |
慶大霉素-兩性霉素B溶液 | 0.5毫升 | 慶大霉素:10 µg/mL 兩性霉素 B:0.25 µg/mL |
青霉素-鏈霉素-兩性霉素B溶液 | 0.5毫升 | 青霉素:10 單位/mL 鏈霉素:10 µg/mL 兩性霉素 B:25 ng/mL |
酚紅 | 0.5毫升 | 33微米 |
蓋緊生長培養基的瓶子并輕輕旋轉內容物以確保溶液均勻。請勿用力搖晃,以免產生泡沫。給瓶子貼上標簽并注明日期。
完整的生長培養基應在 2°C 至 8°C 的黑暗條件下保存(不要冷凍)。在這些條件下儲存時,完整培養基可穩定保存 30 天。
冷凍保存
1. 檢查所有容器是否有泄漏或破損。
2. 將基礎培養基保存在 2°C 至 8°C 下。不要凍結。避光。使用前加熱介質時,溫度不要超過 37°C。當在 2°C 至 8°C 的黑暗中儲存時,產品在標簽上的有效期內保持穩定。
細菌和真菌測試:沒有檢測到
支原體污染:沒有檢測到
內毒素:< 0.5 EU/毫升
滲透壓:270±10毫滲透壓/千克
酸堿度:7.8±0.3
功能測試:增殖率和形態
本產品僅供實驗室研究使用。它不適用于任何動物或人類治療用途、任何人類或動物消費或任何診斷用途。