組織工程是傳統(tǒng)移植的一種有前途的替代方法。移植是一種外科手術(shù),旨在將組織從一個(gè)部位轉(zhuǎn)移到另一個(gè)部位或從供體轉(zhuǎn)移到患者,用健康的皮膚、骨骼、軟骨、神經(jīng)或血管替換受損的皮膚、骨骼、軟骨、神經(jīng)或血管。相比之下,用于組織工程的生物材料包括支架、細(xì)胞和生物活性分子。這種協(xié)同組合是目前組織修復(fù)和再生的安全的選擇之一。
構(gòu)成組織工程用生物材料的典型元素包括:
腳手架:復(fù)合材料,或天然和合成聚合物
生物活性分子:小分子、蛋白質(zhì)或肽,例如細(xì)胞粘附肽和自組裝肽
單元格(可選):間充質(zhì)干細(xì)胞
由于慢性疾病發(fā)病率的增加、常規(guī)移植供體的低可用性以及醫(yī)學(xué)移植的固有限制,對該領(lǐng)域的興趣一直在穩(wěn)步增長。這些生物材料的目的是促進(jìn)患者的組織再生,或者使用生物活性分子修飾的無細(xì)胞支架,或者將這些修飾的支架與患者自身的MSCs相結(jié)合。
設(shè)計(jì)模仿天然細(xì)胞外基質(zhì),支架是生物相容的、可生物降解的、多孔的和穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),能夠支持細(xì)胞生長。用于這些應(yīng)用的天然聚合物包括膠原蛋白、殼聚糖、彈性蛋白和透明質(zhì)酸(HA)等。用作組織工程生物材料支架的合成聚合物通常包括聚ε-己內(nèi)酯(PCL)、聚乳酸(PLA)和聚乙醇酸(PGA)等。
天然和合成聚合物都有特定的優(yōu)點(diǎn)和局限性。例如,天然聚合物以其高生物相容性而聞名,但機(jī)械性能差,經(jīng)常導(dǎo)致過早分解。相比之下,合成聚合物往往比它們的天然對應(yīng)物更穩(wěn)定,但表現(xiàn)出低生物相容性,經(jīng)常導(dǎo)致炎癥,并最終導(dǎo)致生物材料的排斥。增強(qiáng)生物相容性可降低不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn),通常通過用生物活性分子修飾天然或合成支架的表面來實(shí)現(xiàn)。
細(xì)胞是這些生物材料的另一個(gè)重要組成部分,從脂肪組織或骨髓中分離出來的成人間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是目前再生醫(yī)學(xué)的黃金標(biāo)準(zhǔn)。它們表現(xiàn)出自我再生和分化成不同細(xì)胞類型的能力,使它們成為新的健康組織的有用構(gòu)件。
在目前用于組織工程生物材料的大量生物分子中,肽作為聚合物支架的改性劑起著至關(guān)重要的作用。與蛋白質(zhì)修飾的生物材料相比,肽修飾的支架具有相似的特性。但是與蛋白質(zhì)相比,將肽用于組織應(yīng)用具有幾個(gè)顯著的優(yōu)勢:
肽的合成要簡單得多劃算的而不是蛋白質(zhì)表達(dá)
肽修飾是坦率的
這些小分子也是更有抵抗力溫度和pH值等環(huán)境條件,而蛋白質(zhì)往往在非生理?xiàng)l件下降解
肽往往有較低的免疫原性與大蛋白質(zhì)相比
由于這個(gè)原因,肽已經(jīng)成為用于組織工程應(yīng)用的生物材料的優(yōu)選生物活性成分。下表提供了一些具有突出生物活性的肽的例子:
Type of peptides | Origin | AA sequence/name of the bioactive motif |
---|---|---|
Cell adhesion peptides | Collagen | RGD |
DGEA | ||
GFOGER | ||
GFPGER | ||
GTPGPQGIAGQRGVV (PepGen P-15) | ||
Fibronectin | PHSRN | |
REDV | ||
LDV | ||
KQAGDV | ||
Laminins | IKVAV | |
YIGSR | ||
KAFDITYVRLKF | ||
Bone morphogenetic protein (BMP)-like peptides | BMP-2 | IVAPPGYHAFYCHGECP (P17) |
KIPKASSVPTELSAISTLYLSGGC (P24) | ||
BMP-7 | GQGFSYPYKAVFSTQ (BFP-1) | |
KQLNAISVLYFDD | ||
Vascular endothelial growth factor (VEGF)-like peptides | VEGF | KLTWQELYQLKYKGI (QK) |
Self-assembling peptides (SAPs) | Synthetic | RADARADARADARADA (RAD16) |
VKVKVKVKVdPLPTKVKVKVKV-NH2 (MAX1) | ||
VKVKVKVKVdPLPTKVEVKVKV-NH2 |
所有這些種類的肽增強(qiáng)了用于組織再生的生物材料的生物相容性。更具體地,細(xì)胞粘附肽改善細(xì)胞粘附、增殖和分化。相反,VEGF樣和BMP樣肽分別通過控制血管和骨修復(fù)來模擬這些蛋白。
有趣的是,自組裝肽值得擁有自己的一部分。這些肽形成復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu),通過非共價(jià)鍵(即氫鍵、靜電和疏水相互作用)自發(fā)自組裝。這一過程可以由pH值、溫度或化學(xué)分子等外部信號觸發(fā)。
像其他種類的肽一樣,SAPs可以通過固相肽合成容易地產(chǎn)生。此外,復(fù)雜納米結(jié)構(gòu)的形成可以在生理?xiàng)l件下進(jìn)行,這使得該方法廉價(jià)且高效。這些結(jié)構(gòu)也被稱為肽水凝膠,它們本身可以模擬細(xì)胞外基質(zhì),并作為組織再生生物材料的支架。
自組裝肽是一類快速進(jìn)化的全合成肽,但它們由天然的構(gòu)件組成。據(jù)專家稱,肽水凝膠是各種應(yīng)用中最有前途的元件之一。盡管它們是合成的,但仍保持生物相容性,具有安全的降解性和最小的免疫原性。此外,水凝膠可以很容易地操作,以獲得不同物理性質(zhì)的支架,如孔徑大小,纖維厚度和機(jī)械阻力。
基于RAD的肽仍然是組織工程中常用的生物材料之一。這些肽基于RAD序列,一個(gè)16個(gè)氨基酸的序列,由張和他的同事在麻省理工學(xué)院開發(fā)。RAD16凝膠化可在鹽(即使在低濃度下)或低pH值的存在下被誘導(dǎo)。在這種水凝膠狀態(tài)下,細(xì)胞能夠附著在RAD16基質(zhì)的表面,使其成為組織修復(fù)生物材料的寶貴支架。雖然第一代RAD16肽已經(jīng)商業(yè)化,但它們在生物學(xué)上的應(yīng)用才剛剛開始探索。新一代RAD19生物材料已逐步采用活性和天然生物活性圖案進(jìn)行修飾,以增強(qiáng)組織再生和生物相容性。
P11肽包含另一類合成的自組裝生物活性分子。這些水凝膠化肽在疏水相互作用下組裝,這可以驅(qū)動它們重排為原纖維和纖維。這一類的一些肽只有在加入化學(xué)對應(yīng)物時(shí)才會聚集,使它們能夠適應(yīng)原地的組裝。
盡管在臨床前和臨床研究中獲得了有希望的結(jié)果,但自組裝肽的合成和純化仍然具有挑戰(zhàn)性。這些問題源于水凝膠序列中存在多個(gè)疏水殘基。另一個(gè)問題是TFA的潛在污染,特別是當(dāng)這些肽使用高效液相色譜(HPLC)純化時(shí)。已知TFA對細(xì)胞增殖有負(fù)面影響,需要通過在鹽酸存在下凍干或通過樹脂離子交換將其去除。