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骨切片詳細介紹

更新時間:2023-05-11      點擊次數:1807

通用名稱:骨切片

用于傳統染色法和培養基ELISACrossLaps)骨破壞重吸收的體外精確檢測
骨是一種很有活力的組織,在人的一生中都在不斷地重建。現已證實,在骨中存在一些特殊物質,能夠影響到破骨細胞的活性。因此在北歐生物科技公司,我們使用高質骨而不是牙質應用于研究。現在將向我們的客戶提供此類服務。
每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中,由骨切片上產生凹點證明破骨能力。隨后用培養基酶免吸附試劑盒Crosslaps 檢測上清液。只有當兩項測試都呈陽性時,該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。
破骨細胞產生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統的對凹點染色方法,亦可使用培養基酶免吸附檢測法Crosslaps,兩者關系見圖 1 2由于破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質,而從牛骨切片中提取的蛋白質用于 96 孔板,公司開發了能夠適用于 6122448 孔板的骨皮質切片。如圖 3 所示。
將人破骨細胞分散覆蓋于牛骨皮質片上,然后加入不同濃度的抗重吸收劑(A: 90 µM, B: 30 µM, C: 10µM, D: 0 µM)。第6 天取等量細胞培養上清液用于檢測膠原c 端交聯肽(ctx)的量(培養基 ELISA-CrossLaps
,

從骨片上轉移破骨細胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色,形成可見的凹點(圖 1

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這種 6 孔板大骨片(GBS)來提取破骨細胞蛋白,這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養,對蛋白質的表達是有影響的(數據未列出)。要進行破骨細胞的基因描述實驗時,我們推薦使用這些底物提取 RNA。從骨切片分離 RNA 的方案和人破骨細胞的培養方案可根據要求制定

【來源】
骨切片由牛股骨的皮質部分制成,適合 96 孔板,直徑 6mm,大概 200µm 厚。
【儲存】
骨切片保存于 4°C 70%乙醇中。為了保持骨切片的質量,應縮短使用周期和避免室溫下放置。
【處理】
我們推薦在轉移至 96 孔板之前,先將骨切片置于含培養基的 10%血清中清洗三次。
【培養】
重吸收實驗一般持續 72 小時(見圖 2)。然而在加入試劑到破骨細胞培養液中 16 24 小時后,就可觀察到細微的變化了,甚至 8 小時后即可用相應方法觀察到。
【特征】
與凹點染色和劃線不同,培養基酶免吸附法Crosslaps 不要求破骨細胞培養的終止。因此,可以從相同的股切片中獲得幾個樣品,從而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為可能。材料的處置與常見細胞培養物的處置相同。
【參考文獻】
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HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL164:1537-1545 (2004).
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SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)
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STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).


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